30th EHA Congress Travel Award 受賞レポート　木下　慎太郎

名前：木下 慎太郎【順天堂大学大学院医学研究科血液内科学】
発表形式：Oral

Title:

iPSC-derived CD2-targeted chimeric antigen receptor-T cell therapy for T cell malignancies

Authors:

Shintaro Kinoshita¹, Midori Ishii¹, Jun Ando^1,2, Maksim Mamonkin³, Hiromitsu Nakauchi³, Miki Ando¹

Affiliations:

1. Department of Hematology, Juntendo University School of Medicine, Tokyo, Japan
2. Division of Cell Therapy & Blood Transfusion Medicine, Juntendo University School of Medicine, Tokyo, Japan
3. Center for Cell and Gene Therapy, Baylor College of Medicine, Texas Children's Hospital, Texas, US
4. Institute of Stem Cell Biology and Regenerative Medicine, Stanford University School of Medicine, CA, US

Abstract:

Backgrounds: Relapsed or refractory T-cell leukemia/lymphoma has an extremely poor prognosis, necessitating the development of new therapeutic strategies. One potential approach involves targeting CD2 with chimeric antigen receptor (CAR)-T cell therapy. However, when using peripheral blood T cells, CD2-CAR-T cells (CD2-CAR-Ts) inevitably undergo fratricide, killing each other due to shared CD2 expression thus requiring CD2 gene knockout before CAR transduction. Unfortunately, CD2-knockout T cells often exhibit functional impairment, resulting in reduced in vivo persistence and diminished antitumor efficacy despite their robust in vitro cytotoxicity (Xiang et al., Leukemia 2023). In contrast, induced pluripotent stem cell (iPSC)-derived T cells we generated naturally express only minimal levels of CD2, thereby avoiding fratricide upon CD2-CAR introduction. We therefore hypothesized that iPSC-derived CD2-CAR-Ts could offer a promising treatment option against T-cell malignancies.

Aims: In this study, we aimed to evaluate whether iPSC-derived CD2-CAR-Ts could serve as a new treatment option for T-cell malignancies.

Method: Lentiviral CD2-CAR-transduced iPSCs were differentiated into CD2-CAR-Ts (iPSC-CD2-CAR-Ts). Peripheral blood-derived CD2-CAR-Ts also beared the same CAR design (PB-CD2-CAR-Ts). For in vitro cytotoxicity assessment, Jurkat cells were labeled with ⁵¹Cr and cocultured with PB-CD2-CAR-Ts or iPSC-CD2-CAR-Ts, and the cytotoxic activity against Jurkat cells was assessed. In vivo, NOG mice were intravenously injected with FFluc-labeled Jurkat cells. They were then treated with PB-CD2-CAR-Ts or iPSC-CD2-CAR-Ts. Tumor burden was monitored by measuring fluorescence intensity.

Results: Two CD2-CAR constructs from the same monoclonal antibody were generated, namely, VL-linker-VH (VL-VH CAR) and VH-linker-VL (VH-VL CAR). Using a Z-Movi analyzer, we found that the VH-VL CAR exhibited stronger avidity compared with the VL-VH CAR.  Cytotoxicity of iPSC-CD2-CAR-Ts was overwhelmingly stronger against Jurkat cells than that of PB-CD2-CAR-Ts (72.1% vs. 34.8%; P < 0.0001) at an E:T ratio of 20:1. In vivo, fluorescence intensity on day 28 showed significantly lower level in iPSC-CD2-CAR-T treated mice compared to the untreated mice (p = 0.04). On the other hand, no significant difference was observed in the PB-CD2-CAR-T-treated mice (p= 0.06). iPSC-CD2-CAR-T-treated mice survived significantly longer than untreated mice (p = 0.01), whereas PB-CD2-CAR-T-treated mice showed no survival advantage (p > 0.99). 

Summary/Conclusions: iPSC-CD2-CAR-Ts exhibited robust in vitro cytotoxicity and superior in vivo tumor suppression with survival benefits compared with PB-CD2-CAR-Ts. These findings suggest that iPSC-CD2-CAR-Ts may represent a novel therapeutic modality for T cell malignancies.

EHA2025参加レポート

この度はJSH-EHA Travel Grant Programにご採択いただき、心より感謝申し上げます。2025年6月にイタリア・ミラノで開催されたEHA2025に参加する機会をいただき、大変光栄に存じます。

ミラノは美しい歴史的建造物が点在し、洗練された街並みを楽しめる魅力的な都市でした。会期中は天候にも恵まれ、気温も心地よく過ごしやすい気候の中、充実した日々を送ることができました。会場は中心部からアクセスの良い位置にあり、各国から多くの研究者や臨床医が集まり、活気に満ち溢れていました。

私は今回、順天堂大学の安藤美樹主任教授をはじめ、多くの先生方にご指導をいただき、再発・難治性T細胞性白血病に対する新規CAR-T療法の開発をテーマとして発表させていただきました。

T細胞腫瘍におけるCAR-T療法においてはCAR-T同士が互いに攻撃し合う“fratricide”の発生による抗腫瘍効果の減弱が問題となります。T細胞腫瘍はCD2を発現しているため良い標的となります。CD2を標的とするCAR-T療法ではCD2遺伝子をknockoutすることでfratricideを回避できますが、T細胞の機能異常が問題となります。私たちの研究では、CD2がほとんど発現していないiPSC由来T細胞を利用した治療戦略を提案いたしました。特に、抗体の可変ドメインの配置を最適化することで、抗原結合力の強いCD2-CARの作製に成功しました。マウスモデルでも、iPSC由来CD2-CAR-T細胞の優れた抗腫瘍効果を示すことを報告しました。

海外学会でのoral presentationは今回が初めてであり、大きな緊張感と共に臨みましたが、座長の先生方が温かく迎えてくださったことで落ち着いて発表することができました。発表後には海外の研究者から積極的な質問をいただき、解析手法や研究の進展に役立つ貴重な助言も得ることができました。発表前は不安を感じていた15分という時間も、終わってみると非常に短く感じられ、今回の経験を通じて研究内容はもちろん、英語での質疑応答やプレゼンテーション技術をさらに高め、また将来このような機会に挑戦したいとの強い思いを新たにしました。

また、会期中には多くの先生方のご発表やご講演を拝聴し、現在注目されている疾患や治療法のみならず、まだ広く知られていない新たな知見についても数多くの研究成果が報告されていたことが非常に印象的でした。臨床医学のセッションでは最新の知識や考え方に触れることができ、基礎医学の要素が強いセッションでは、自分がこれまで知らなかった現象や解析手法を丁寧に理解することができ、世界の最先端の基礎研究に触れる貴重な機会となりました。臨床・基礎の両面において、大変有意義な学会であったと感じております。

今回の学会参加を通じて、世界の最前線の研究に触れ、多くの刺激と今後の研究に対する新たな視点を得ることができました。このような貴重な機会をくださった順天堂大学の安藤教授をはじめとする指導医の先生方、日本血液学会およびEHA関係者の皆様、そして日々の研究活動を支えてくださるすべての方々に改めて深く御礼申し上げます。

今後とも、血液疾患治療の向上に貢献できるよう研究に邁進してまいります。